PCR چقدر برای تشخیص آبله میمون مفید است؟

سازمان بهداشت جهانی (WHO) در 23 ژوئیه 2022 شیوع اخیر عفونت های ویروس آبله میمون در مناطق غیر بومی را یک اورژانس بهداشت عمومی با نگرانی بین المللی (PHEIC) در 23 جولای 2022 اعلام کرد. تشخیص زودهنگام، جداسازی موارد و اقدامات مهار برای کاهش شیوع این ویروس.

در آغاز همه‌گیری بیماری کروناویروس 2019 (COVID-19)، نتایج آزمایش مثبت به دلیل آلودگی و تغییرات در حساسیت آزمایش بیش از هزار برابر آسیب دید. به منظور جلوگیری از از دست دادن اعتماد به روش بالقوه با ارزش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) که می تواند در صورت لزوم به سرعت به کار گرفته شود، نویسندگان اخیرا نظارت بر یورو مطالعه مجله قابلیت اطمینان این رویکرد تحلیلی را برای تشخیص آبله میمون در برابر پس‌زمینه استفاده گسترده آن در تشخیص کووید-19 بررسی می‌کند.

مطالعه: آبله میمون: آزمایش دیگری برای PCR. اعتبار تصویر: luchschenF / Shutterstock.com

ویروس آشنا

از آنجایی که آبله میمون ویروس جدیدی نیست، در حال حاضر چندین آزمایش برای تشخیص آن در دسترس است که به محققان اجازه می دهد اعتبار و عملکرد PCR را برای تشخیص آبله میمون تایید کنند.

از آنجایی که سایر ویروس های آبله بسیار نادر هستند، بعید به نظر می رسد که در ویژگی آزمایش اهمیت داشته باشند. با این حال، حساسیت PCR ممکن است به دلیل منفی کاذب، در صورت تشخیص سایر ویروس‌های ارتوپاکس توسط آزمایش، مختل شود.

برای بهینه‌سازی نتایج، نویسندگان اقدامات احتیاطی مهمی را ارائه می‌کنند که باید توسط آزمایشگاه‌ها انجام شود، مانند استفاده از دستگاه‌ها و نمونه‌های خودشان برای ارزیابی پروتکل‌های آزمایش‌های موجود. ارزیابی حد تشخیص (LOD) و سایر ارزیابی‌های مشابه باید از کنترل‌های تعیین‌شده کمی مشابه نمونه بالینی مورد آزمایش استفاده کنند. با چنین اقدامات احتیاطی، “می‌توان انتظار داشت که سنجش‌های به‌خوبی طراحی و بهینه‌سازی شده، عملکرد تقریباً تک‌کپی را نشان دهند

READ  CHANEL کمپین چشم با Angèle

آلودگی ممکن است به دلیل آلودگی نمونه های منفی از نمونه های مثبت با بار ویروسی بالا در زمانی که هر دو در یک اجرا قرار دارند افزایش یابد. آلودگی همچنین ممکن است یکپارچگی قالب های مصنوعی مانند آمپلیکون ها را تغییر دهد، به همین دلیل است که نمونه ها جدا از محل تجزیه و تحلیل تهیه می شوند.

کنترل های مثبت اغلب از اولیگونوکلئوتیدهای مصنوعی در طول توسعه آزمایش اولیه برای یک میکروارگانیسم جدید استفاده می کنند. قابل ذکر است که این می تواند منجر به آلودگی نیز شود.

اطمینان از دقت

نویسندگان در مورد نیاز به استانداردسازی و توصیف عواملی که ممکن است بر دقت نتایج آزمایش قبل از تجزیه و تحلیل تأثیر بگذارند، بحث می‌کنند. برخی از این عوامل ممکن است شامل انتخاب سواب و نمونه، روش جمع آوری نمونه و محیط انتقال باشد. هر یک از این عوامل بر مقدار و کیفیت نهایی اسید نوکلئیک مورد نیاز برای سنجش PCR تأثیر می‌گذارند.

کنترل های مناسب باید ایجاد شود، زیرا آنها عملکرد آزمایش را با ویژگی هایی مانند حد تشخیص (LOD) تعیین می کنند. استفاده از ویروس یا ذرات ویروس مانند بر کنترل های مصنوعی ترجیح داده می شود که فقط می توانند کنترل های مثبت را برای مرحله PCR ارائه دهند.

با افزایش نظارت، تغییرات ژنتیکی که ممکن است بر عملکرد آزمایش تأثیر بگذارد و نتایج منفی کاذب را افزایش دهد باید شناسایی شوند.

در حال حاضر تغییرات ژنتیکی در برخی از توالی های مورد هدف توسط PCR های منتشر شده در ویروس آبله میمون که در حال حاضر در گردش است وجود دارد.

آزمایش کمی DNA ویروس آبله میمون همچنین برای ارزیابی ویژگی های عملکرد تحلیلی و همچنین تغییر الگوهای شیوع و بیماری کلیدی است. این امر مستلزم ارزیابی دقیق روش شناختی برای به دست آوردن نتایج قابل مقایسه بین گروه های مختلف تحقیقاتی است.

READ  دادگاه عالی از واژگون کردن ACA - مجدداً خودداری کرد

در این زمینه، PCR کمی (qPCR) به دلیل فرمت خودکار آن رایج شده است. با این وجود، qPCR فقط یک کمیت خام را ارائه می‌کند که برای تعیین آستانه آزمایش، کمی‌سازی واقعی ویروسی یا گزارش LOD نامناسب است، مگر اینکه به درستی کالیبره شود.

روش ارجح برای کمی سازی، اندازه گیری تعداد واحدهای ژنوم ویروسی در کپی در واحد حجم است. این امر مستلزم استفاده از استانداردهای نرمال شده ای است که خصوصیات کامل را پشت سر گذاشته اند و در نتیجه برای این نوع ارزیابی آزمون قابل اعتماد هستند.

دیجیتال PCR (dPCR) یک ماده مرجع بالقوه است که می تواند در زمان توسعه استانداردهای تشخیص دیگر مورد استفاده قرار گیرد. با این حال، dPCR اجازه آزمایش با توان بالا را نمی دهد، به طور گسترده کمتر مورد استفاده قرار می گیرد و جدیدتر است. با این وجود، این روش تحلیلی نقطه مقایسه ارزشمندی برای تشخیصی COVID-19 PCR در همه گیری کنونی ارائه کرده است.

بنابراین، آزمایش‌های PCR که قبلاً منتشر شده‌اند، می‌توانند به اعمال dPCR در شیوع آبله میمون و تعیین ارزش کنترل‌های ویروس آبله میمون کمک کنند. از این موارد می توان برای اطمینان از مطابقت PCR های تشخیصی با مشخصات عملکرد استفاده کرد.

رهنمودها

WHO دستورالعمل های موقتی را برای آزمایش آبله میمون با استفاده از PCR ارائه کرده است. با این حال، این دستورالعمل‌ها شامل برخی اصطلاحات است که می‌تواند منجر به سردرگمی و اختلافات باقی‌مانده در نتایج آزمایش با اجازه دادن به تفاسیر مختلف از مراحل کلیدی در طراحی آزمایشی، نقاط پایانی، کیفیت نمونه‌ها، اسیدهای نوکلئیک و مواد کنترل شود.

READ  مراقبت از پوست Isa Lazo | وبلاگ نویس زیبایی انگلیس

بار ویروسی می تواند بر سهولت تشخیص DNA ویروسی و همچنین خطر مثبت کاذب از طریق آلودگی متقابل تأثیر بگذارد. مقادیر چرخه کمی (Cq) مقادیر را هزار برابر از هم پوشش می دهند، بنابراین تفسیر آن را دشوار می کند.

مطالعات آینده در مورد بررسی مقادیر DNA ویروس آبله میمون باید تخمینی از نحوه مطابقت یک مقدار Cq داده شده با نسخه های ژنوم ویروسی ارائه دهد.

توصیه های دیگری توسط کمیته های فنی سازمان بین المللی استاندارد (ISO) ارائه شده است. برای به حداکثر رساندن دقت آزمایش در شرایط مشابه، باید از تجربه همه‌گیری COVID-19 استفاده کرد.

نتیجه گیری

در حالی که همه‌گیری COVID-19 PCR را به عنوان یک روش تشخیصی در سرتاسر جهان مطرح کرد، همچنین ظرفیت کل برای آزمایش مولکولی پاتوژن‌های مختلف را افزایش داد. افزایش ظرفیت آزمایش و تجربه به دست آمده در این دوره به کوتاه شدن زمان واکنش برای پاسخ مشابه به آبله میمون و سایر شیوع های بیماری زا جدید یا در حال ظهور کمک می کند.

اولویت اصلی در هر موردی که قرار است PCR در مقیاس وسیع استفاده شود این است کهاستاندارد کردن پاسخ آزمایشگاهی و اجرای درس های آموخته شده از COVID-19” این امر به اطمینان از نتایج قابل اعتماد، ایجاد اعتماد و ارائه داده های ارزشمند برای هدایت تصمیمات بهداشت عمومی و مدیریت بیمار کمک می کند.